检测蛋白质的方法有哪些

1、凯氏定氮法

凯氏定氮法是测定化合物或混杂物中总氮量的一种办法。即在有催化剂的条件下,用浓硫酸消化样品将有机氮都改变成无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液接收,再以尺度盐酸滴定,就可盘算出样品中的氮量。

由于蛋白质含氮量比拟恒定,可由其氮量盘算蛋白质含量,故此法是经典的蛋白质定量办法。

2、双缩脲法

双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的剖析办法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。

当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,配合物呈紫色。可通过比色法剖析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反响的敏锐度为5-160mg/ml。鉴定反响蛋白质单位1-10mg。

3、酚试剂法

取6支试管分离标号,前5支试管分离参加不同浓度的尺度蛋白溶液,最后一支试管加待测蛋白质溶液,不加尺度蛋白溶液,在室温下放置30分钟,以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对比,于650nm波优点测定各管中溶液的吸光度值。

4、紫外接收法

大多数蛋白质在280nm波优点有特点的最大接收,这是由于蛋白质中有酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸存在,可用于测定0.1~0.5mg/mL含量的蛋白质溶液。

取9支试管分离标号,前8支试管分离参加不同浓度的尺度蛋白溶液,1号试管不加尺度蛋白溶液,最后一支试管加待测蛋白质溶液,而不加尺度蛋白溶液,每支试管液体总量通过参加蒸馏水补足而坚持一致,将液体混杂均匀,在280nm波优点进行比色,记载吸光度值。

5、考马斯亮蓝法

考马斯亮蓝显色法的根本原理是依据蛋白质可与考马斯亮蓝G-250 定量联合。当考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质联合后,其对可见光的最大接收峰从 465nm 变为 595nm。

在考马斯亮蓝 G-250 过量且浓度恒定的情形下,当溶液中的蛋白质浓度不同时,就会有不同量的考马斯亮蓝 G-250 从接收峰为 465nm 的情势改变成接收峰为 595nm 的情势,而且这种改变有必定的数目关系。

一般情形,当溶液中的蛋白质浓度增长时,显色液在 595nm 处的吸光度根本能坚持线性增长,因此可以用考马斯亮蓝 G-250 显色法来测定溶液中蛋白质的含量。

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